粵微科研團(tuán)隊(duì)在圍繞靈芝孢子油促進(jìn)皮膚修復(fù)的研究上取得新突破。近日，具有前瞻性的科研成果《從靈芝中分離的活性成分通過(guò)TRPV1/SMAD信號(hào)促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合》（An active ingredient isolated from Ganoderma lucidum promotes burn wound healing via TRPV1/SMAD signaling）成功發(fā)表于著名國(guó)際期刊《AGING》。

盡管鎮(zhèn)痛藥、抗感染藥物和生長(zhǎng)激素已廣泛用于深度燒傷以及醫(yī)美后遺癥的治療。但目前，能夠同時(shí)發(fā)揮抗感染和增殖作用的藥物很少見(jiàn)報(bào)道。本次研究成果，為粵微靈芝孢子油在皮膚屏障修復(fù)、傷口愈合及醫(yī)美后遺癥的修復(fù)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，具有積極意義。

用 picrosirius 溶液（含0.1%Sirius Red的飽和苦味酸水溶液，pH 2.0）處理后，組織切片顯示膠原蛋白 I 為橙紅色，而膠原蛋白 III 顯示為淡綠色。

偏光顯微鏡下觀察，假手術(shù)組第 1 天和第 5 天的天狼星紅染色切片差異不大。在靈芝孢子油治療組中，相對(duì)于未治療（對(duì)照組）組，粵微靈芝孢子油組中膠原蛋白 I 含量（紅色區(qū)域）多于膠原蛋白 III 含量（綠色區(qū)域）。天狼星紅染色定量分析表明，與對(duì)照組相比，粵微靈芝孢子油組膠原蛋白I與III的比例顯著增加。

HaCaT細(xì)胞是人類表皮細(xì)胞，廣泛用于驗(yàn)證藥物的效果。

在本研究中發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于對(duì)照組，在開(kāi)始用 60 μg/ml 粵微靈芝孢子油治療傷口 48 小時(shí)后，HaCaT 細(xì)胞增殖顯著增加。細(xì)胞遷移測(cè)定還表明，與對(duì)照組相比，60 μg/ml 粵微靈芝孢子油減少了劃痕距離并顯著增加了傷口閉合。

圖 3. 粵微靈芝孢子油對(duì) HaCaT 細(xì)胞的增殖和遷移作用

網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)集的結(jié)果表明，SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7和TGF-β1是粵微靈芝孢子油推定靶標(biāo)中最重要的蛋白質(zhì)。TGF-β3也很重要，但影響比上述蛋白質(zhì)小，假定目標(biāo)的富集分析由KEGG進(jìn)行并可視化。

分析表明，TGF-β信號(hào)通路是燒傷治療中靈芝孢子油活性最重要的通路。綜合網(wǎng)絡(luò)分析顯示，粵微靈芝孢子油可能通過(guò)與TRPV1和TGF-β信號(hào)通路相互作用來(lái)改善燒傷創(chuàng)面愈合。

圖 4.?粵微靈芝孢子油主要成分的二維結(jié)構(gòu)

Western印跡分析顯示，與對(duì)照組相比，粵微靈芝孢子油處理后SMAD2/3磷酸化水平顯著增加，而SMAD2/3表達(dá)水平降低。免疫熒光染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，粵微靈芝孢子油明顯增加了皮膚燒傷創(chuàng)面中TRPV1的表達(dá)。用靈芝孢子油刺激的 HaCaT 細(xì)胞用于模擬體外燒傷模型。靈芝孢子油加速了 SMAD2/3核轉(zhuǎn)位，并在LPS刺激下明顯促進(jìn)了這種轉(zhuǎn)位。

最后，為了驗(yàn)證TRPV1是否通過(guò)增加TGF-β通路中最重要的信號(hào)蛋白SMAD2/3的表達(dá)來(lái)影響皮膚燒傷愈合，將HaCaT 細(xì)胞與TRVP1抑制劑預(yù)孵育3 小時(shí)或16小時(shí)，然后然后用靈芝孢子油孵育48小時(shí)。TRPV1抑制劑顯著下調(diào)了靈芝孢子油對(duì)細(xì)胞增殖的增強(qiáng)。

免疫熒光分析表明，與單獨(dú)的靈芝孢子油相比，添加TRPV1抑制劑明顯降低了TRPV1和 SMAD2/3的表達(dá)。

圖 7.?TRPV1 抑制劑對(duì) HaCaT 細(xì)胞增殖的影響